總RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)
操作步驟： 1. 樣品處理： a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
b. 動(dòng)物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。 c. 貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，每106細(xì)胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。 d. 細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。 e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細(xì)胞，可加入2倍體積紅細(xì)胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘。
4. 2-8℃ 12000 rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無(wú)色的水相中，把水相轉(zhuǎn)移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8 12,000 rpm℃離心2min，棄廢液。6. 第4步收集的上清中加入200ul無(wú)水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2-8 12000rpm℃離心2min，棄廢液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，2-8 12,000 rpm℃離心2min，棄廢液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8 12,000 rpm℃離心2min，棄廢液。9. 12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。10. 將吸附柱放入新管中，向膜*滴加50-100ul RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
注意事項(xiàng)： 1，所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過(guò)程要小心，帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測(cè)。
相關(guān)產(chǎn)品：
R1600 DEPC處理水
P1011 酚：氯仿：異戊醇＝25：24：1（PH<5.0）
R1050 5×RNA Loading Buffer
SR0020 RNA wait(非凍型組織RNA保存液)
M1010 10×MOPS 緩沖液 |
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