注意事項 
本產(chǎn)品為凍干粉形式，使用前請瞬時離心，加適當(dāng)溶劑溶解后使用。 
儲存條件 
-20℃干燥、避光保存，自收貨之日起一年有效。若配制成水溶液，應(yīng)小量分裝保存。

產(chǎn)品介紹 
鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結(jié)合于F-肌動蛋白的雙環(huán)肽（1）。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。 在pH升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力。
    熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可在納摩爾水平染色F-肌動蛋白（1-3）。在各種植物細(xì)胞或動物細(xì)胞中，標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對大、小細(xì)絲具有相似的親和力，平均每個肌動蛋白亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子。不同于抗體，鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白的結(jié)合親和力在不同物種間沒有顯著變化。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區(qū)域之間的對比度非常大。鬼筆環(huán)肽將單體/聚合物的平衡轉(zhuǎn)向聚合狀態(tài)，將聚合臨界濃度降低至30倍（3,4）。Phallotoxins可通過抑制細(xì)胞松弛素的解聚，碘化鉀和升高的溫度，穩(wěn)定F-肌動蛋白，。因為鬼筆環(huán)肽綴合物很小，大約直徑12-15埃，分子量<2000道爾頓，多種肌動蛋白結(jié)合蛋白，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白結(jié)合。更重要的是，鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白絲保持功能，標(biāo)記甘油肌纖維仍然收縮，標(biāo)記的肌動蛋白絲仍然可以繼續(xù)移動（5,6）。而且熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可用于對細(xì)胞中F-肌動蛋白進(jìn)行定量研究（7,8）。
  
實驗方法 
儲液制備 
熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末，制備成200U/mL的儲液（300T規(guī)格染料加入1.5mL的液體）。 
熒光標(biāo)記的標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量。使用時的推薦稀釋比例為1:40-1:200，一個單位相當(dāng)于200μL總?cè)旧w積中加入1-5μL 200U /mL儲備溶液。 

注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

固定細(xì)胞染色 
以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或8孔室玻片上的貼壁細(xì)胞的染色步驟。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片。 
1. 用PBS清洗細(xì)胞3次。 
2 . 用含有3.75％甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞，冰上固定15分鐘。 
注意：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。 
3. 用PBS清洗細(xì)胞3次。 
4. 用含0.5％Triton X-100的PBS溶液在室溫下透化細(xì)胞10分鐘。 
5. 用PBS清洗細(xì)胞3次。 
6. 用200μL PBS稀釋1-5μL熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽儲液，加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育20min，進(jìn)行染色。 
注：染色體積可根據(jù)樣本情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā)，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi)。 
7. 用PBS清洗細(xì)胞2-3次。 
8. 熒光顯微鏡觀察。此產(chǎn)品具有很好的光穩(wěn)定，樣品可以在PBS中成像，但為了效果最佳，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。 
活細(xì)胞染色 
熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性，因此沒有被廣范用于活細(xì)胞標(biāo)記。 然而，有報道稱活細(xì)胞可能通過胞飲或未知機(jī)制進(jìn)行標(biāo)記（9-12）。 一般來說，染色活細(xì)胞時需要更多的染料。 或者熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細(xì)胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細(xì)胞運(yùn)動（13-16）。

Reference 
1.Wieland, T. in Phallotoxins, Springer-Verlag, New York (1986); 
2. J Muscle Res Cell Motil 9, 370 (1988); 
3. Methods Enzymol 85, 514 (1982); 
4. Eur J Biochem 165, 125 (1987); 
5. Nature 326, 805 (1987); 
6. Proc Natl Acad Sci USA 83, 6272 (1986); 
7. Blood 69, 945 (1987); 
8. Anal Biochem 200, 199 (1992); 
9. J Cell Biol 105, 1473 (1987); 
10. Proc Natl Acad Sci USA 77, 980 (1980); 
11. Nature 284, 405 (1980); 
12. CRC Crit Rev Biochem 5, 185 (1978); 
13. J Cell Biol 106, 1229 (1988); 
14. J Cell Biol 103, 265a (1986); 
15. Eur J Cell Biol 24, 176 (1981); 
16. Proc Natl Acad Sci USA 74, 5613 (1977)

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標(biāo)題:In situ photo-crosslinked adhesive hydrogel loaded with mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles promotes diabetic wound healing

成員:Yixi Wang, Ping Song, Lina Wu, Zixuan Su, Xingyu Gui, Canyu Gao, Hanxing Zhao, Yudong Wang, Zhengyong Li, Ying Cen, Bo Pan, Zhenyu Zhang, Changchun Zhou

論文因子:7.571 發(fā)表期刊:Journal of Materials Chemistry B pmid:36594635

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標(biāo)題:Laminin alpha 4 promotes bone regeneration by facilitating cell adhesion and vascularization

成員:Yong Tang, Keyu Luo, Jiulin Tan, Rui Zhou, Yueqi Chen, Can Chen, Zhigang Rong, Moyuan Deng, Xueke Yu, Chengmin Zhang, Qijie Dai, Wenjie Wu, Jianzhong Xu, Shiwu Dong, Fei Luo

論文因子:8.947 發(fā)表期刊:Acta Biomaterialia pmid:33711525

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標(biāo)題:Intracellular delivery of piezotronic-dominated nanocatalysis to mimic mitochondrial ROS generation for powering macrophage immunotherapy

成員:Junkun Feng, Xiaoyi Liu, Kai Li, Weiwei Zhao, Wenjun Wang, Shaohua Ge, Hong Liu, Jianhua Li

論文因子:17.6 發(fā)表期刊:Nano Energy

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標(biāo)題:HDAC5 inhibition attenuates ventricular remodeling and cardiac dysfunction

成員:Zhu Chenxi, Piao Zhehao, Jin Li

論文因子:3.7 發(fā)表期刊:Orphanet Journal of Rare Diseases pmid:37667300

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標(biāo)題:Revelation of Adhesive Proteins Affecting Cellular Contractility through A Reference-free Traction Force Microscopy

成員:Yingjun Yang, Kuankuan Han, Siyuan Huang, Kai Wang, Yuchen Wang, Shukai Ding, Le Zhang, Miao Zhang, Bingshe Xu, Shufang Ma, Yongtao Wang, Shengli Wu, Xinlong Wang

論文因子:7 發(fā)表期刊:Journal of Materials Chemistry B pmid:38466580

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

SF594標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(橘紅)

SF594標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(橘紅)