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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算實(shí)例


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數(shù)據(jù)讀取和處理


以夾心法為例

1

推薦使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長檢測,測定450 nm和630 nm波長下的OD值,并用450 nm的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

2

ELISA的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品通常要設(shè)置1~2個(gè)復(fù)孔進(jìn)行檢測,分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、樣本吸光度的平均OD值。

3

每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。

4

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中待檢物質(zhì)的含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。


結(jié)果計(jì)算

若使用Origin軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,詳細(xì)步驟如下:


第一步: 打開軟件,分別在A(X)B(Y)輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度標(biāo)準(zhǔn)品OD值。

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第二步:選擇擬合曲線類型

選中上步輸入的數(shù)值,按如下操作依次點(diǎn)擊選項(xiàng)。

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第三步:在左側(cè)選擇<Find X/Y>,右側(cè)勾選< Find X from Y>。完成上述操作后,點(diǎn)擊Fit按鍵,擬合曲線和相關(guān)信息將自動(dòng)生成。

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第四步:查看標(biāo)準(zhǔn)曲線信息(如參數(shù)值,R-Square等)

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第五步:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

選擇第四個(gè)工作表<Fit NLF Find X from Y1>,在左側(cè)A1(Y)輸入樣本的OD值,對應(yīng)的濃度將在右列自動(dòng)生成。

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注意事項(xiàng)

1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋,計(jì)算樣本濃度時(shí)請乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。


若使用ELISA Calc軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,詳細(xì)步驟如下:


第一步:將標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)在Excel表格中整理成兩列,第一列是濃度,第二列是平均OD值。

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第二步:打開ELISA Calc軟件,復(fù)制Excel中數(shù)值部分,點(diǎn)軟件的<粘貼>;選擇<回歸/擬合模型>,一般優(yōu)先選擇Logistic曲線擬合(四參數(shù))、直線回歸或二次曲線回歸;點(diǎn)擊<回歸/擬合>。

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第三步:點(diǎn)<由Y計(jì)算X值>,將樣本OD值在Excel中整理成一列,右鍵選復(fù)制,然后點(diǎn)軟件的<粘貼>,點(diǎn)軟件的<復(fù)制>,即可將計(jì)算的結(jié)果到Excel中粘貼。

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注意事項(xiàng)

1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋,計(jì)算樣本濃度時(shí)請乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。




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